ELISA là kỹ thuật được dùng trong miễn dịch học, ứng dụng thịnh hành trong các ngành y học, nông nghiệp, thực phẩm,... Vào y học, chuyên môn ELISA ứng dụng trong những xét nghiệm về HIV, các bệnh tương quan đến viêm gan khôn xiết vi hay bệnh án nhiễm cam kết sinh trùng.
Bạn đang xem: Kỹ thuật elisa là gì
Kỹ thuật ELISA giúp họ phát hiện nay được các kháng thể hoặc phòng nguyên trong mẫu mã thử bởi phản ứng sinh hóa miễn dịch quánh hiệu. Vậy nghệ thuật ELISA có các phương pháp nào, gần như điều cần phải biết khi sử dụng kỹ thuật này là gì hãy thuộc theo dõi trong nội dung bài viết sau nhé.
Nguyên lý nghệ thuật ELISA
Kỹ thuật ELISA là một cách thức sinh hóa, được sử dụng hầu hết trong miễn dịch học nhằm phát hiện nay sự hiện diện của một chống thể hoặc chống nguyên vào mẫu.
Nguyên lý của nghệ thuật ELISA đó là phụ thuộc sự quánh hiệu chống nguyên và phòng thể. Nó đang được triển khai theo các bước sau:
kháng nguyên (antigen) hoặc chống thể (antibody) đã biết được gắn bên trên một giá chỉ thể rắn. Tiếp đó cho mẫu gồm chứa chống thể hoặc kháng nguyên buộc phải tìm vào giếng. Bổ sung cập nhật thêm kháng thể tất cả gắn cùng với enzyme.Thêm cơ hóa học (substance) để enzyme đang làm biến đổi cơ hóa học này rồi tạo nên tín hiệu màu có thể xác định được với máy đo huỳnh quang.Các phương pháp của kỹ thuật ELISA
ELISA trực tiếp
Đây là cách thức phẫu thuật về trong ngày được thực hiện nhiều trong ELISA định tính và ít sử dụng trong ELISA định lượng. Nó mang ưu thế là chỉ cần một lần ủ, nhờ đó sẽ tiết kiệm chi phí được thời hạn và hạn chế được việc kiểm soát và điều hành trong các quy trình thực hiện.
Nhược điểm của cách thức này là nhuộm color nền cao vị sự link không sệt hiệu giữa kháng thể với mặt phẳng rắn cùng protein thắt chặt và cố định trên mặt phẳng rắn. Đồng thời, việc lưu lại từng loại kháng thể nhằm dùng trong mỗi kháng nguyên cũng tốn kém, nhất là trong trường thích hợp phải chuẩn chỉnh đoán một số lượng lớn những nhiều loại kháng nguyên không giống nhau.
Phương pháp ELISA con gián tiếp
Với phương pháp này thì điểm mạnh của nó là tất cả độ tinh tế cao, chỉ việc tạo một một số loại kháng thể có enzyme sẽ giúp đỡ nhận biết cho những kháng nguyên khác nhau.
Nhược điểm của cách thức ELISA gián tiếp là phải triển khai nhiều bước, khiến cho việc kiểm soát điều hành các điều kiện cũng trở nên tăng lên, kéo dài quá trình tiến hành xét nghiệm cùng thời gian chuẩn đoán.
Phương pháp ELISA Sandwich
Đối với phương thức ELISA Sandwich thì có rất nhiều ưu điểm nổi trội, độc nhất vô nhị là việc có độ nhạy bén cao, bớt được nhượm màu sắc nền cũng tương tự các phản ứng không sệt hiệu. Vì đã được một số loại bỏ phần lớn các nguyên tố tạp chất giúp bội phản ứng được thực hiện đơn giản dễ dàng và dễ dãi hơn.
ELISA cạnh tranh
Phương pháp này biết tới rất hiệu quả, nó đến định lượng những yếu tố hiện diện trong mẫu mã với lượng khôn cùng thấp. Cách thức này thực hiện một lượng chống nguyên cùng loại với chống nguyên mà bọn họ muốn định lượng trong mẫu mã (kháng nguyên cạnh tranh) mang lại phản ứng miễn dịch với cùng một loại kháng để đặc biệt cố định trên phương diện rắn. Cuối cùng, đo lượng chống nguyên này bởi hoạt tính enzyme được link cùng với nó nếu phòng nguyên đối đầu và cạnh tranh càng hiện hữu nhiều tức là loại kháng nguyên kia trong chủng loại càng ít với ngược lại.
Cách áp dụng của xét nghiệm ELISA vào y học
Sàng lọc ung thư, thể nghiệm thuốc và sở hữu thai
Việc phát hiện tại sớm căn bệnh ung thư để giúp đỡ bệnh nhân có tỷ lệ chữa trị và sống sót cao hơn. Vày đó, xác định dấu hiệu ung thư sớm luôn được chú trọng trong y học.
Các kỹ thuật ELISA nhiều phần đều có sẵn để thực hiện và ứng dụng rộng thoải mái trong việc thực hành thực tế lâm sàng để xét nghiệm ung thư tiến độ đầu cho người bệnh, bao gồm có ung thư vú và ung thư phòng trứng.
Bên cạnh kia kỹ thuật ELISA còn được ứng dụng để giúp đỡ phát hiện nồng độ những chất phạm pháp trong mẫu mã nước tè như: dung dịch phiện, cannabinoids, amphetamine, cocaine, benzodiazepine, methadone.
Đồng thời ELISA cũng góp theo dõi cường độ nồng độ dược chất đối với các người mắc bệnh đang điều trị căn bệnh lý, điển bên cạnh đó kháng thể phòng nhiễm trùng vào viêm khớp dạng cung cấp và viêm ruột. Nghệ thuật ELISA cũng tốt được sử dụng để giúp phát hiện tại và khám nghiệm hormone gonadotrophin màng đệm ở tín đồ (h
CG) nội địa tiểu, qua đó phát hiện một vài bệnh lý hoặc đàn bà đang với thai.
Phương pháp xét nghiệm ELISA hoàn toàn có thể dùng để chẩn đoán một số trong những bệnh lý bao gồm có:
Bệnh thiếu ngày tiết ác tính;Bệnh Lyme;Bệnh giang mai;Ung thư biểu tế bào tế bào vảy;Bệnh toxoplasmosis;Tiêu chảy vị rotavirus;Virus Zika;Phương pháp ELISA được áp dụng như một phương pháp sàng lọc trước khi bác sĩ chỉ định những xét nghiệm nâng cao hơn.
Phát hiện phòng thể đái cầu
ELISA góp phát hiện các kháng thể tiểu cầu một cách dễ dàng và đơn giản và không nhiều tốn yếu hơn một số cách thức khác. Đồng thời nó cũng khá được thực hiện tại để hỗ trợ nhiều tin tức hơn cho phần đông xét nghiệm như lymphocytotoxicity (LCT) và xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang tiểu mong (PIIFT).
Phát hiện dị ứng thực phẩm
Phương pháp này cũng được ứng dụng phổ biến trong ngành công nghiệp thực phẩm, góp phát hiện sự hiện diện của các chất tạo dị ứng. Từ này mà dán nhãn cảnh báo người tiêu dùng sản phẩm về những thành phần có khả năng gây dị ứng theo yêu ước pháp luật.
Phát hiện tại virus bằng virus
Đây là 1 trong những ứng dụng rất thịnh hành ở các nước sẽ phát triển, chỗ mà có tỷ lệ lây lan truyền cao. Phương pháp này giúp bình chọn tại chỗ và đưa ra tác dụng ngay chớp nhoáng từ đó giúp bác sĩ triển khai các phương thức điều trị kịp thời với hiệu quả.
Trên đây là những thông tin về chuyên môn ELISA và ứng dụng của nó vào y học. Hy vọng đã cung ứng đến các bạn những kiến thức có ích để phát âm hơn về phương pháp này.
1. Nguyên lý của ELISA là gì?
Để tiến hành một phản nghịch ứng ELISA bao gồm ít độc nhất vô nhị một chống thể bắt cặp quánh hiệu với kháng nguyên cố thể. Những mẫu cósố lượng chống nguyên chưa biếtđược cố định và thắt chặt trên một mặt phẳng vững chắc- giá bán thể rắn (thường là một tấm polystyrene vi chuẩn) hoặc không quánh hiệu (thông qua tiêu thụ lên bề mặt) hoặc sệt hiệu(thông qua chụp bằng kháng thể khác đặc hiệuvới chống nguyên tương tựtrong thí nghiệm ELISA sandwich).
Sau khi phòng nguyên được nắm định, các kháng thể vạc hiện có thêm vào, tạo ra thành một phức hợp với các chống nguyên. Các kháng thể phân phát hiện rất có thể liên kết với một loại enzyme, hay chính nó rất có thể được vạc hiện vày một kháng thể sản phẩm cấpliên kết cùng với một loại enzyme trải qua liên kết cùng hóa trị giữa các phân tử sinh học. Những phần của phòng thể ELISA là tương tự như với cách thức western blot. Giữa mỗi bước, những đĩa hay được rửa bằng dung dịch tẩy vơi để loại trừ cácprotein hoặc các kháng thể không gắn. Sau bước rửa cuối cùng, cơ chất củaenzyme có thêm vàođể chế tạo ratín hiệu rất có thể nhìn thấy, giúp chỉ ra số lượng kháng nguyên vào mẫu.
2. Thiết bị cần thiết cho một phản bội ứng ELISA
- Đĩa ELISA trộn rắn
Đĩa ELISA 96 giếng được sử dụng nhiều duy nhất trong ELISA thường là polystyrene hoặc các dẫn xuất của polystyrene thu được bằng phương pháp biến thay đổi hóa học hoặc chiếu xạ bề mặt. Phổ biến nhất là đĩa 96 giếng được tổ chức thành 8 hàng cùng 12 cột. Mỗi giếng giữ khoảng chừng 350 µl thể tích cùng với một khu vực bên trong khoảng 2,5 cm2. Cách đây không lâu hơn, đĩa 384 giếng với 1536 giếng đã được trở nên tân tiến với size tổng thể giống như truyền thống 96 giếng. Bọn chúng được áp dụng trong bài toán kiểm tra lượng mẫu mã lớn. Không tính ra, cũng có đĩa 96 giếng cùng với giếng bởi một nửa thể tích giếng truyền thống. Phân tíchđược thực hiện trong những giếng với thể tích bằng một nửa này là đồng nhất về công suất với đĩa size truyền thống, nhưng tiết kiệm ngân sách đáng nhắc về thành phần phản nghịch ứng. Một sự đổi mới vừa mới đây cũng đã kiến nghị làm tròn phần đáy giếng núm vì tại một góc 90 độ. Điều này đã giúp cho việc rửa dễ dàng hơn và tăng hiệu quả rửa.
- ELISA Pipet
Có 2 loại pipet thường xuyên được sử dụng là pipet đa kênhvà pipet đối kháng kênh. Pipet đối chọi kênh chia thành 2 dạng: thắt chặt và cố định thể tích và điều chỉnh thể tích (1- trăng tròn ml, 10- 100 ml, 20- 200 ml..), còn pipet đa kênh thường được dùng là một số loại 8 đầu tip và 12 đầu tip để tương xứng với sốlượng hàng với cột của đĩa ELISA. Về thao tác có thể chia thành pipet bày bán bán auto vàpipet phân phối trọn vẹn tự động.
- hệ thống máy rửa
Hệ thống sản phẩm công nghệ rửa ELISA bao gồm thể tạo thành các nhiều loại như sau: rất có thể rửa một mặt hàng hoặc cột tại 1 thời điểm, có thể rửa một dịp cả đĩa hoặc rửa một lần nhiều đĩa. Tùy ở trong vào mục đích quá trình mà ta lựa chọn loại máy phù hợp.
- máy đọc tác dụng ELISA
Tương tự trang bị rửa ELISA, thiết bị đọc ELISA cũng tạo thành 3 nhóm: có thể đọc mộthàng hoặc cột vào một lần, rất có thể đọc công dụng của cả đĩa cùng một lần hoặc đọc công dụng nhiều đĩa và một lúc.
3. Các loại ELISA
a) Direct ELISA ( ELISA trực tiếp) - Đơn giản và tiết kiệm ngân sách và chi phí thời gian
Phương pháp
ELISA thẳng được xem là loại dễ dàng nhất trong cácphương pháp ELISA, kháng nguyên (Antigen- Ag) được hấp phụlênmột tấm nhựa, sau đó một lượng lớn của một loạiprotein (thường là albumin huyết thanh bò- BSA) được chế tạo để khóatất cả các vị trí link khác. Trong những khi đó, một nhiều loại enzyme sẽliên kết với một kháng thể vào một phản ứng riêng biệt biệt, tinh vi enzyme- chống thể này được áp dụng để hấp phụ các kháng nguyên. Sau thời điểm phức enzyme- chống thể dư thừa bị loại bỏ bỏ hết, tinh vi enzyme- chống thể nào gắn thêm với phòng nguyên sẽcòn lại trên giếng. Bằng phương pháp thêm vào cơ chất của enzyme, dấu hiệu phát ra đại diệncho lượng kháng nguyên vào mẫu.
Tuy nhiên, so sánh ELISA trực tiếpvới ELISA loại gián tiếp về phương diện kỹ thuật thì thấy, vào ELISA con gián tiếp, quá trình tiến hành cũngtương tự nhưng có nhữngkhác biệt quan trọng đặc biệt và cóthêm một bước ngã sung. Sau khoản thời gian kháng nguyên được hấp thụ vào những đĩa,và sau bước cho BSA, những kháng thể tiếp theo sẽ được sản xuất là những kháng thể hoàn toàn có thể nhận diện những kháng nguyên (kháng thể này không gắn enzyme). Sau đó, một chống thể lắp enzyme đãđược sẵn sàng vàthêm vào đĩa nhằmphát hiện các kháng thể hấp phụ với phòng nguyên (còntrong ELISA trực tiếp, phức hệkháng thể- enzyme sẽtrực tiếp kêt nạp với chống nguyên).
Ưu điểm của phương phápELISA trực tiếp
So với những phương pháp
ELISA khác, phương phápnàyđược tiến hành trong thời hạn ngắnhơn do chỉ có một chống thể được áp dụng và ít bước tiến hành hơn. Điều này hoàn toàn có thể được thực hiện để đánh giá phản ứng chống thể - chống nguyên gắng thể, và giúp loại trừ phản ứng chéo cánh giữa các kháng thể khác.
ELISA trực tiếp
Các chống thể chủ yếu phải được khắc ghi riêng, nêntốn nhiều thời gian và không linh hoạt khi tiến hành nhiều thí nghiệm.
Ngoài ra, kỹ thuật này còn có độ nhạy cảm thấp hơn bởi cáctín hiệu được khuếch đạiít hơn, tức thị độ nhạy thấp hơn.
b) ELISA con gián tiếp(Indirect ELISA)- Thông dụng dẫu vậy hiệu quả
Phương pháp
ELISA con gián tiếp bao gồm haibước ELISAliên quan mang đến haiquá trình đính thêm của phòng thể sơ cấp và chống thể thứ cung cấp được đánh dấu. Chống thể sơ cấp được ủ với chống nguyên và kế tiếp là ủ với chống thể thiết bị cấp. Tuy nhiên, bài toán này rất có thể dẫn đến các tín hiệu không quánh hiệu chính vì xảy racác bội nghịch ứng chéo cánh của chống thể lắp thêm cấp.
Các bước cơ bạn dạng trong ELISA gián tiếp:
1. Các đĩa giếng được ủ với chống nguyên, rửa và khóa bởi BSA.
Xem thêm: Doughnut economics kinh tế học hình bánh doughnut) xác định 7 cách
2. Thêm mẫu mã và kháng thể vào cùng rửa.
3. Enzyme gắn với kháng thể thứ cung cấp được thêm vàovà rửa.
4. Thêm cơ chất, enzyme trên phòng thể tạo thành tín hiệu màu hoặc huỳnh quang.
Ưu điểm của phương phápELISA gián tiếp
+ Độ nhạy cao: nhiều hơn thế một kháng thể được lưu lại và gắn trên từng phân tử phòng nguyên.
+ Linh động: các kháng thể sơ cấp khác nhau có thể được sử dụng với một kháng thể đồ vật cấp gồm đánh dấu.
+Tiết kiệm: phòng thể thứ cung cấp được ghi lại được dùng ít hơn.
Trong đối chiếu ELISA con gián tiếp, chống thể của mẫu mã được kẹp theo mô hình sandwich trọng tâm kháng nguyên trên đĩa và enzyme tấn công dấu, liên kết kháng đặc hiệu globulin. Việc thêm cơ chất của enzyme vào tạo ra raphản ứng màu. độ mạnh màu tỉ lệ thành phần thuận cùng với lượng kháng thể của mẫu. Chủng loại càng những kháng thể, cường độ màu càng mạnh. ELISA con gián tiếp phù hợp cho việc xác định mức độ tổng kháng thể tất cả trong mẫu.
c) ELISA sandwich - Độ nhạy cao
ELISA sandwichlà một nhiều loại ít phổ cập của chuyên môn ELISA, cơ mà rất kết quả trong bài toán phát hiện chống nguyên trong mẫu. Rộng nữa, nhiều cỗ kit thương mại dịch vụ ELISA được xuất bản dựatrên loại ELISA này.
ELISA sandwichđịnh lượng phòng nguyên giữa hai lớp phòng thể (kháng thể bắt- capture với phát hiện- detection). Các kháng nguyên được định lượng buộc phải chứa tối thiểu hai epitope kháng nguyên có chức năng liên kết với các kháng thể, tối thiểu là với hai kháng thể vận động trong kỹ thuậtsandwich. Các kháng thể 1-1 dòng hoặc đa chiếc đều rất có thể được áp dụng như làcác chống thể bắt và phòng thểphát hiện nay trong khối hệ thống ELISA sandwich. Chống thể đơn dòng có một epitope duy nhất cho phép phát hiện và định lượng giỏi sự không giống biệt bé dại trong chống nguyên. Một phòng thể đa cái thường được sử dụng như các kháng thể bắt giữcàng các kháng nguyên càng tốt. (Epitope- đưa ra quyết định kháng nguyên, là địa điểm trên phòng nguyên, vị trí gắn với phòng thể).
Quy trình
ELISA sandwichcó thể trở ngại để về tối ưu hóa và cần phảikiểm tra các kháng thể bắt cặp sai. Điều này bảo đảm các chống thể này phát hiện nay được cácepitope khác biệt trên mộtprotein đíchđể bọn chúng không cản trởcác phòng thể sẽ gắn.
Các cách thực hiện:
Chuẩn bị mặt phẳng đã biết trước lượng chống thể bắt được gắn.Khóacác vị trí dính không sệt hiệu trên bề mặt.Cho những mẫu có chứakháng nguyên lênđĩa.Rửa đĩa, để thải trừ các phòng nguyên ko gắn.Thêm một kháng thể quánh hiệu vào, cùng gắn vớikháng nguyên (do đógọi là "sandwich": chống nguyên bịkẹp thân hai chống thể);Thêm kháng thể máy cấp link enzyme - trên đây làkháng thể phát hiện, phòng thể này sẽliên kết quánh hiệuvới vùng Fc của phòng thể (không đặc hiệu).Rửa đĩa, để các liên kết enzyme- kháng thể không gắnbị nhiều loại bỏ.Thêm cơ hóa học củaenzyme đểtạo màu sắc hoặc bộc lộ huỳnh quang quẻ hoặc điện hóa.Đo độ hấp thụhoặc huỳnh quang đãng hoặctín hiệu điện của các giếngđể xác minh sự có mặtvà số lượng kháng nguyên.Những hình ảnh ở phía dưới bao gồm việc áp dụng một kháng thể thứ cấp cho liên kếtvớienzyme, khoác dù, theo phương diệnkỹ thuật, điều đó là không cần thiết nếu những kháng thể sơ cung cấp liên kếtvới enzyme. Tuy nhiên, việc sử dụng một liên kếtkháng thể thứ cấp sẽ kị được quá trình tốn kém của việc tạo nên các chống thể links enzyme cho từng kháng nguyên màngười ta ước ao phát hiện.
Bằng cách sử dụng một phòng thể liên kết enzyme liên kết với các khu vực Fc của phòng thể khác, một phòng thể link enzyme giống hệt như vậycó thể được sử dụng cho một loạt những thí nghiệm. Nếu không tồn tại kháng thể bắt duy trì ở lớpđầu tiên, bất kỳ protein trong mẫu mã (bao gồm các protein tiết thanh) cũngcó thể hấp phụ lên mặt phẳng đĩa, làm giảm số lượng kháng nguyên thắt chặt và cố định được. Sử dụng các kháng thể đặc hiệu đã đượctinh sạchđể gắn thêm với các kháng nguyên trong đĩa để giúp đỡ giảm bớtviệclàm sạch phòng nguyên trường đoản cú mộthỗn hợp phức tạp trước khi định lượng, đơn giản dễ dàng hóa so sánh vàtăng độ sệt hiệu với độ tinh tế của phân tích ELISA sandwich.
Quy trình ELISA sandwich
(1)Đĩa được tủ một lớp kháng thể bắt giữ;(2)Thêm mẫu, bất kìkháng nguyên nào có mặt sẽliên kết với phòng thể bắt giữ;(3)Kháng thể vạc hiện được thêm vào, và gắn vớikháng nguyên;(4)Kháng thể đồ vật cấp link enzyme nhận thêm vào, cùng gắn với kháng thể phạt hiện;(5)Thêm cơ hóa học của enzyme với phát tín hiệu.
Ưu điểm của phương phápSandwich ELISA:
+ mẫu mã không cầnphải được tinh sạch trước lúc phân tích.
+ Độ đặc hiệu cao, vì thực hiện hai phòng thể nên các kháng nguyên/ chất phân tích đượcbắt với phát hiện đặc hiệu.
+ tương thích cho các mẫu phức tạp, bớivì các kháng nguyên không yêu cầu đòi hỏi phải tinh sạchtrước khi tiến hành định lượng.
+ Linh hoạt với độ nhạy bén cao, bởi cả hai phương pháp phát hiện nay trực tiếp với gián tiếp đềucó thể được sử dụng. Độnhạy cao hơn 2-5 lần so với phương pháp
ELISA thẳng hoặc gián tiếp, tuy vậy thấp hơn ELISpot.
d) ELISA cạnh tranh: hình thức cơ bản
Vấn đề chủ yếu của ELISA tuyên chiến và cạnh tranh là quy trình gắncạnh tranh tiến hành bởi phòng nguyên cội (kháng nguyên mẫu) và kháng nguyên có thêm vào. Các bước của phương pháp
ELISA cạnh tranh khác một vài ba điểmso cùng với ELISA loại gián tiếp, ELISA sandwichvà ELISA trực tiếp.
Một quy trình đơn giản và dễ dàng như sau:
1. Chống thể chính- sơ cấp cho (chưa tiến công dấu) được ủ với kháng nguyên mẫu.
2. Phức hợp kháng thể- phòng nguyên tiếp nối được sản xuất đĩa 96 giếng đã có phủtrước các kháng nguyên tương tự.
3. Kháng thể không bám được sẽ bị loại bỏ trải qua bướcrửa đĩa. (Càng những kháng nguyên trong mẫu, càng ít kháng thể sẽ hoàn toàn có thể liên kết với những kháng nguyên vào giếng, vì đógọi là "cạnh tranh".)
4. Những kháng thể thứ cấp cho gắn enzym màđặc hiệu vớicác phòng thể sơ cung cấp sẽđược thêm vào.
5.Thêm cơ chất, enzyme phân giải cơ chất vàtạotín hiệu màu sắc hoặc huỳnh quang.
Đối cùng với phương pháp
ELISA cạnh tranh, nồng độ chống nguyên mẫu mã càng cao, các tín hiệu cuối cùng càng yếu. Ưu điểm chủ yếu của phương phápnàylà năng lực sử dụng các mẫu thô hoặc ko tinh khiết màvẫn gắnchọn lọc ngẫu nhiên kháng nguyên nào bao gồm mặt.(Lưu ý rằng một số bộ kit ELISA cạnh tranh bao gồm kháng nguyên gắnenzyme nhiều hơn thế là phòng thể gắnenzyme. Chống nguyên lưu lại sẽcạnh tranh địa chỉ gắn vớikháng thể sơ cung cấp với chống nguyên trong mẫu mã (kháng nguyên này không đánh dấu). Chống nguyên trong chủng loại càng nhiềuthì càng ít kháng nguyên tấn công dấuđược giữ gìn trong giếng và biểu đạt càng yếu).
ELISA cạnh tranh:
+ Độđặc hiệu cao, áp dụng haikháng thể nên các kháng nguyên/ hóa học phân tích đượcgiữ cùng phát hiện.
+ tương thích cho những mẫu phức tạp, vì những kháng nguyên ko đòi hỏitinh sạch trước khi thực hiện phản ứng.
+ Tính linh hoạt cùng độ nhạy cao.
+ Phát hiện nay được lượng chống nguyên ít - kháng nguyên càng ít dấu hiệu càng mạnh.
4. Ứng dụng của kỹ thuật
ELISA
Nếu một protein với khá nhiều epitope được phân phát hiện, thể nghiệm sandwich là một trong những lựa lựa chọn tốt. Thửnghiệm này yên cầu hai kháng thể bội phản ứng với các epitope khác nhau. Mặc dù nhiên, nếu những phân tử có khá nhiều epitope lặp đi lặp lại, trong một thửnghiệm sandwich bạn cũng có thể sử dụng những kháng thể tương tự cho tất cả việc bắt phòng nguyên (capture) với phát hiện tại (detection). Không tính ra, nếu gồm nguồn các chất cần phát hiện ở dạng tinh sạch mát mà hoàn toàn có thể được hấp thu một cách tác dụng trong giếng, người ta hoàn toàn có thể thiết lậpkỹ thuật ELISAcạnh tranh, trong các số đó chất cần phân tích dạng tinh khiết được cố định và thắt chặt sẽ đối đầu với chất phân tích trong mẫu mã để link với các kháng thể được tiến công dấu. Vào trường đúng theo này chuẩn độ kháng thể là điều cần thiết, còn nếu như không độ nhạy cảm thí nghiệm sẽ bị giảm.
Đĩa polystyrene sẽ giữ một loạt các protein với số lượng tăng dần dần tùy nằm trong vào độ đậm đặc của chúng trong dung dịch. Số lượng cụ thể và tối ưu cần được xác định cho từng protein, nhưng một số quan sát tầm thường đã được thực hiện đối với các chống thể. Đĩa cóđộ dính từtrung bình mang lại thấp hoàn toàn có thể gắn100-200 ng
Ig
G/cm2, trong những lúc đĩa cóđộ dính cao thường rất có thể gắn lên tới 400-500ng Ig
G/cm2.Ngoài protein, đĩa polystyrene cònhấp thụ các peptide cóchiều dài từ 15 - đôi mươi axit amin. Để đạt được links mạnh, một peptide sẽ buộc phải cả hai ảnh hưởng kỵ nước cùng ưa nước. Thông thường, nhược điểm nhằm hấp phụ peptide thẳng là bọn chúng có xu hướng có ít epitope, cùng nếu chúng hệ trọng với nhựa, câu hỏi bắtcủakháng thể sẽ gặp gỡ khó khăn. Một chiến thuật khác là gắncác peptide lênmột protein to hơn thông qua 1 đoạn spacer- nhằmcung cấpkhoảng cách giữa các peptide và protein, có thể chấp nhận được các chống thể xúc tiến đượcvới những peptide.
Xét nghiệm một sinh vật chẳng hạn như phát hiện nay một tế bào vi khuẩn hay virus cũng có thể sử dụng kỹ thuật ELISAsandwich với chống thể tương tự cho cả bắt và phát hiện. Nếu những phân tử đíchlà hoặc chỉ cómột epitope duy nhất, cần biến đổi các phần vẫn mô tảở trên. Phiên bản thân các phân tử bé dại hoặc ko hấp thu xuất sắc với trộn rắn, hoặc có thể bị che phủ bởi các protein đạt thêm vào, vì chưng vậy, các phân tử nhỏ thường hoàn toàn có thể được lắp vào những protein khủng hơn, cung cấp một phương tiện để gắncác epitope ước muốn với trộn rắn,tạo ra một thông số kỹ thuật cho phép các epitope bị tóm gọn bởi một kháng thể.
Carbohydrate và protein bị glycosyl hóa nhiều sẽ không hấp thu xuất sắc với polystyrene bởi các lực được biểu lộ ở trên, do chúng gồm rất ít năng lực tham gia vào những tương tác kỵ nước. Protein màng tế bào sản sinh từ các tế bào và bảo trì trong dung dịch bởi chất tẩy cọ cũng không được hấp thụ tốt khi bao gồm sự hiện nay diện của những chất tẩy rửa. Sử dụng links cộng hóa trị hoặc sút nồng độ hóa học tẩy rửa là cách rất tốt để gắn các protein này. Vào thực tế, link cộng hóa trị rất có thể được triển khai trong sự hiện tại diện của những chất tẩy cọ như Tween-20 với Triton X-100.
Bạn cũng có thểThích
