1.Nguyên lý chuyên môn ELISA
ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent assay) là một phương pháp sinh hoá sử dụng chủ yếu trong miễn dịch học để phát hiện tại sự hiện diện của một phòng thể hoặc phòng nguyên trong một mẫu.Bạn đang xem: Kỹ thuật elisa sandwich
Hình 1: nguyên tắc ELISA
Nguyên lý của nghệ thuật ELISA là phụ thuộc vào tính sệt hiệu kháng nguyên - phòng thể cùng được thực hiện bằng những cách cơ bản sau: kháng nguyên - antigen (KN) hoặc phòng thể - antibody (KT) đã hiểu rằng gắn trên một giá chỉ thể rắn, kế tiếp cho mẫu tất cả chứa phòng thể - antibody (KT) hoặc chống nguyên (KN) đề xuất tìm vào giếng. Bổ sung thêm chống thể gồm gắn cùng với ezyme. Bước cuối cùng thêm cơ chất (substance), enzyme sẽ biến đổi cơ chất này cùng tạo dấu hiệu màu rất có thể xác định được sử dụng máy đo huỳnh quang.
2. Các phương pháp ELISA
ELISA trực tiếp (direct ELISA):
Phương pháp này thường áp dụng trong ELISA định tính, ít cần sử dụng trong định lượng. Cách thức này có ưu thế là chỉ việc một lần ủ vì vậy tiết kiệm thời hạn và buổi tối thiểu được việc điều hành và kiểm soát các điều kiện trong quá trình thực hiện (thay đổi ánh nắng mặt trời và buffer cho mỗi lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, nhược điểm của nó là nhuộm color nền (background staining) cao vì sự liên kết không đặc hiệu của chống thể với mặt phẳng rắn và những protein cố định trên bề mặt rắn. Việc khắc ghi từng các loại kháng thể sử dụng cho mỗi kháng nguyên cũng rất tốn kém, nhất là lúc phải chẩn đoán một trong những lượng lớn những loại phòng nguyên khác nhau.
ELISA gián tiếp (indirect ELISA):
Ưu điểm của phương pháp này là độ nhạy cao chỉ cần tạo một các loại kháng chống thể mang enzyme để nhận ra cho các kháng nguyên không giống nhau. Tuy nhiên nhược điểm của nó là tăng số bước triển khai do đó có tác dụng tăng việc kiểm soát các điều kiện, quy trình thực hiện nay xét nghiệm và kéo dài thời gian chẩn đoán.
ELISA sandwich:
Phương pháp này có nhiều ưu điểm quá trội, đầu tiên là độ nhạy cảm cao giảm được nhuộm màu sắc nền và các phản ứng không đặc hiệu vày đã vứt bỏ được phần nhiều các yếu tố tạp, làm phản ứng được thực hiện dễ ợt hơn.
Hình 2: Các phương thức kỹ thuật ELISA
ELISA tuyên chiến và cạnh tranh (competitive ELISA)
ELISA tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh là phương pháp ELISA rất tác dụng cho định lượng những yếu tố hiện hữu trong mẫu mã với lượng nhỏ. ELISA tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh sử dụng một lượng phòng nguyên cùng nhiều loại với phòng nguyên cơ mà ta muốn định lượng trong mẫu (kháng nguyên cạnh tranh) mang đến phản ứng miễn dịch với 1 loại phòng thể sệt hiệu cố định trên khía cạnh rắn, sau đó đo lượng phòng nguyên tuyên chiến đối đầu này trải qua hoạt tính enzyme được link với nó. Chống nguyên đối đầu và cạnh tranh càng hiện hữu nhiều cho biết thêm loại kháng nguyên kia trong chủng loại càng ít và ngược lại.
3. Phần nhiều điều cần xem xét khi thực hiện kỹ thuật ELISA
Do chuyên môn ELISA là chuyên môn miễn dịch bán tự động nên tác dụng xét nghiệm đang bị tác động nhiều bởi các yếu tố như: con người, biện pháp thao tác, hóa chất, lắp thêm phân tích. Để làm chủ chất lượng tốt các chuyên môn xét nghiệm ELISA yêu mong phải thực hiện đúng theo tiến trình của mỗi các loại xét nghiệm.
3.1. Cơ chế và hóa chất
- Ống nghiệm.
- giá đựng ống nghiệm.
- Micropipette có những thể tích không giống nhau từ 1^l mang lại 1000^l.
- Đầu type nhựa đã nhập vào Micropipette.
- Giấy thấm.
- lắp thêm rửa giếng ELISA.
- đồ vật đọc ELISA.
- bộ hóa chất có có:
+ những thanh nhựa đang gắn phòng nguyên/kháng thể + hỗn hợp rửa.
+ Calibration + hội chứng âm + triệu chứng dương.
+ cộng hợp.
+ Cơ chất.
+ dung dịch pha loãng huyết thanh.
+ chất ngưng bội nghịch ứng.
3.2. Mẫu bệnh dịch phẩm
+ áp dụng mẫu tiết tĩnh mạch được cho vô vào ống nghiệm không bẩn không cất chất kháng đông hoặc tất cả chứa hóa học chống đông (Heparin/EDTA) tùy theo yêu mong từng loại xét nghiệm.
+ Mỗi chủng loại máu sẽ được để vào các ống nghiệm đơn lẻ có dán mã Barcode với tên tuổi đầy đủ, có nắp vặn kín.
+ các mẫu máu được bỏ vô hộp kín vận đưa về chống xét nghiệm trong thời hạn sớm nhất.
+ thông thường các mẫu máu để làm các xét nghiệm ELISA sẽ bình ổn trong 12h ở nhiệt độ phòng từ đôi mươi - 25 ºC, ánh sáng 2 - 8 ºC định hình trong 24 - 48h.
+ Tại phòng xét nghiệm các mẫu máu sẽ tiến hành phân phối về quanh vùng thực hiện tại từng xét nghiệm riêng cùng mã hóa số mẫu mã theo từng dịch vụ thương mại xét nghiệm để hạn chế việc lây nhiễm chéo hoặc nhầm lẫn mẫu bệnh phẩm.
3.3. Thống trị chất lượng
Kỹ thuật ELISA là chuyên môn miễn dịch bán auto cho bắt buộc việc quản lý chất lượng trong quá trình làm xét nghiệm đóng một vai trò cực kỳ quan trọng. Cần thiết phải gửi ra các quy trình kiểm soát và điều hành chất lượng ngặt nghèo tại từng bước thực hiện:
+ Trước xét nghiệm: Mẫu căn bệnh phẩm cần đạt yêu cầu không được vỡ vạc hồng cầu, ko nhiễm khuẩn, nồng độ mỡ huyết cao cũng tác động đến tác dụng xét nghiệm.
+ vào xét nghiệm: triển khai Calibration cùng Control trong mỗi lần tiến hành mẫu theo đúng yêu ước của từng cỗ kít xét nghiệm.
+ Sau xét nghiệm: công dụng mẫu người bệnh chỉ được đồng ý khi con đường Calibration cùng Control trong cùng một lần triển khai đạt tác dụng tốt. Tác dụng sau khi tiến hành phân tích hoàn thành nên thực hiện các phần mềm ghi nhận tác dụng trực tiếp, tránh ghi bằng tay thủ công gây sai số kết quả do nhầm lẫn lúc vào sổ.
3.4. Các bước kỹ thuật
Thực hiện theo như đúng hướng dẫn ở trong phòng sản xuất.
Quy trình gồm công việc chính sau đây:
Bước 1: mang lại mẫu dịch nhân, bệnh âm, hội chứng dương vào giếng nhựa đã gắn sẵn kháng nguyên/kháng thể. Ủ ở nhiệt độ phòng hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo phía dẫn trong phòng sản xuất.
Bước 2: Rửa các giếng bởi dung dịch đệm PBS - Tween 20, ngấm giấy đến ráo nước.
Bước 3: cho cộng hòa hợp vào mỗi giếng, ủ ở ánh nắng mặt trời phòng hoặc 37 ºC, thời gian ủ theo hướng dẫn ở trong phòng sản xuất.
Bước 4: Rửa các giếng bởi dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy cho ráo nước.
Bước 5: đến cơ hóa học vào mỗi giếng, đợi chờ cho màu xuất hiện thêm (15 - 30 phút).
Bước 6: mang lại dung dịch ngưng bội nghịch ứng.
Xem thêm: Trường Đại Học Kỹ Thuật Công Nghệ Cần Thơ, Trường Đại Học Kỹ Thuật
Bước 7: Đọc tác dụng bằng trang bị đọc ELISA từ động
Hình 3: phản nghịch ứng ELISA sandwich
Tóm lại trong những bước của quá trình kỹ thuật ELISA đều có khả năng ảnh hưởng đến công dụng xét nghiệm nếu như người kỹ thuật viên thực hiện không có tác dụng đúng theo các bước đã xây dựng. Những yếu tố nguy cơ hay gặp mặt có thể dẫn cho sai số tác dụng là:
+ hóa chất không để bình ổn ở ánh nắng mặt trời phòng trước khi làm xét nghiệm.
+ Hút sai thể tích chủng loại pha loãng, sai thể tích thuốc thử.
+ thời hạn ủ và ánh sáng không đúng: gây âm thế hoặc dương tính giả.
+ Rửa không sạch: nên áp dụng máy rửa tự động hóa để bảo đảm đủ thể tích nước rửa và chu kỳ rửa, ko thấm khô khay mẫu sau thời điểm rửa xong.
+ không đọc hiệu quả ngay sau thời điểm dừng bội nghịch ứng.
3.5. Biện luận kết quả
- Ngưỡng dương tính có thể khác nhau đối với từng các loại xét nghiệm. Biện luận tác dụng dựa trên ngưỡng dương tính bởi vì nhà thêm vào đưa ra.
- các kỹ thuật miễn kháng phát hiện chống thể cho công dụng gián tiếp, không tồn tại giá trị xuất xắc đối.
- kết quả âm tính cũng không loại trừ hoàn toàn ko nhiễm bệnh, rất có thể do mới bị nhiễm, hoặc bị lan truyền quá lâu, hoặc lượng kháng nguyên/kháng thể quá không nhiều để rất có thể phát hiện nay được bằng phương thức ELISA. Vào trường hợp ngờ vực mắc bệnh dịch trên lâm sàng yêu cầu làm lại xét nghiệm sau 1-2 tuần. Xét nghiệm vài lần để theo dõi dịch chuyển của chống thể/ phòng nguyên có giá trị rộng là xét nghiệm một lần. Giả dụ cần, cần kiểm tra lại bằng những kỹ thuật khác.
- công dụng dương tính cũng ko khẳng định trọn vẹn vì rất có thể dương tính giả vị phản ứng chéo giữa các loại cam kết sinh trùng hoặc căn cơ gây bệnh.
Vì vậy, các phản ứng miễn kháng tìm chống nguyên/kháng thể không thể nỗ lực thế trọn vẹn xét nghiệm trực tiếp trong chẩn đoán tại sao bệnh. Tác dụng xét nghiệm, mặc dù âm tốt dương, cũng cần được xem xét một bí quyết cẩn thận, kết hợp với các nguyên tố dịch tễ hoặc gần như xét nghiệm bổ sung khác (sinh học tập phân tử, nuôi ghép tế bào…) và những hỗ trợ phi lâm sàng khác (XQ, vô cùng âm…).
Với nhóm ngũ siêng gia, bác sĩ giàu tởm nghiệm, hệ thống máy móc hiện đại cũng giống như quy trình cai quản chất lượng nghiêm khắc (theo tiêu chuẩn chỉnh ISO 15189:2012), nghệ thuật ELISA được triển khai tại cơ sở y tế Đa khoa MEDLATEC luôn bảo đảm kết quả xét nghiệm sớm nhất, đúng đắn nhất. Mọi thắc mắc xin contact tổng đài 1900 565656 để được tư vấn và giải đáp.
ELISA (Enzyme-Linked Immuno
Sorbent Assay) là một trong kỹ thuật sinh hóa để phát hiện phòng thể hay kháng nguyên vào mẫu phải phân tích. Bây chừ ELISA được sử dụng rộng rãi trong nhiều nghành nghiên cứu vớt như y học, nông nghiệp trồng trọt và nhất là trong các quy trình kiểm tra an toàn chất lượng các thành phầm thực phẩm.
1.Khái niệm về ELISA
Nguyên tắc: phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay- xét nghiệm kêt nạp miễn dịch link với enzyme) có tương đối nhiều dạng mà đặc điểm chung là đều dựa vào sự phối kết hợp đặc hiệu giữa chống nguyên và phòng thể, trong những số đó kháng thể được đính thêm với một enzyme. Khi nếm nếm thêm cơ chất tương thích (thường là nitrophenol phosphate) vào phản bội ứng, enzyme đã thủy phân cơ hóa học thành một chất bao gồm màu. Sự xuất hiện thêm màu chứng tỏ đã xảy ra phản ứng quánh hiệu giữa kháng thể với kháng nguyên và trải qua cường độ color mà hiểu rằng nồng độ chống nguyên hay chống thể nên phát hiện.
Phương pháp này được thiết kế với cho vấn đề phát hiện với định lượng vật hóa học như peptides, protein, antibodies, hormone,… Đôi khi nó còn được gọi bởi một tên gọi khác là EIA (Enzyme Immuno
Assay)
Kĩ thuật này hơi nhạy và đối kháng giản, chất nhận được ta khẳng định kháng nguyên hoặc phòng thể ở một nồng độ siêu thấp (khoảng 0,1 ng/ml). So với kĩ thuật miễn dịch phóng xạ (RIA- Radio Immuno Assay) thì kỹ năng này rẻ tiền và an ninh hơn nhưng mà vẫn bảo đảm an toàn độ chính xác như nhau. ELISA được dùng để làm xác định những tác nhân gây bệnh như virus, vi khuẩn, nấm, kí sinh.
Kĩ thuật ELISA gồm tía thành phần thâm nhập phản ứng là: kháng nguyên, kháng thể và chất tạo màu; thực hiện qua nhì bước:
- làm phản ứng miễn kháng học: Là sự phối kết hợp giữa chống nguyên và chống thể- bội phản ứng hóa học: thông qua hoạt tính xúc tác của enzyme có tác dụng giải phóng oxy nguyên tử
(Trích từ Chemicon International)
2.Phân loại ELISA2.1.Direct ELISA (ELISA trực tiếp)
Direct ELISA: Đây là dạng đơn giản dễ dàng nhất của phương pháp ELISA. Trong đó, phòng nguyên đề nghị phát hiện sẽ tiến hành gắn thẳng lên bề mặt giá thể và sẽ tiến hành phát hiện bởi một kháng thể tốt nhất (kháng thể này đã có gắn enzyme).
Sơ thứ 2.1: Tiến trình tiến hành phản ứng ELISA trực tiếp
- Ưu điểm: Đơn giản nhất- Nhược điểm:+ Độ quánh hiệu bị số lượng giới hạn vì thường thì kháng nguyên có ít nhất là 2 epitope (trình diện kháng nguyên) mà phương thức này chỉ sử dụng 1 chống thể gắn vào trong 1 epitope.+ Phải đánh dấu cho từng kháng thể siêng biệt với từng đối tượng.2.2.ELISA loại gián tiếp
Indirect ELISA: phương pháp này không giống Direct ELISA tại vị trí kháng thể bắt chống nguyên ko được lắp enzyme nhưng mà nó là mục tiêu gắn quánh hiệu của một kháng thể không giống (kháng thể này mới là phòng thể được lắp với enzyme).
Sơ vật 2.2: Tiến trình triển khai phản ứng ELISA gián tiếp
- Ưu điểm: chống thể lắp enzyme hoàn toàn có thể sử dụng để lưu lại cho nhiều nhiều loại kháng nguyên nên tiện nghi và kinh tế tài chính hơn, thuận lợi thương mại hóa.- Nhược điểm: Độ quánh hiệu của từng chống huyết thanh là không giống nhau. Điều này dẫn đến tác dụng khác nhau giữa các thí nghiệm và vày đó cần phải thử nghiệm với rất nhiều kháng ngày tiết thanh không giống nhau để kết quả rất có thể tin tưởng được.
2.3.Sandwich ELISA
Đây là một dạng ELISA được sử dụng phổ cập nhất trong trong thực tế do nó mang đến phản ứng dạn dĩ và nhạy. Được gọi là “sandwich” là do tác dụng thí nghiệm được reviews thông qua sự kết hợp của hai các loại kháng thể là kháng thể bắt (capture antibodies) và phòng thể phát hiện tại (detection antibodies). Nghệ thuật này cũng được phân có tác dụng hai dạng là Direct sandwich ELISA (DAS-ELISA - Double antibody sandwich) cùng Indirect sandwich ELISA (TAS-ELISA – Triple antibody sandwich).
DAS ELISA gồm sự dính tiêu cực của kháng thể vào trộn rắn (đáy giếng). Hầu như kháng thể này sau đó kết hợp với các chống nguyên có thêm vào. Hồ hết kháng nguyên được trộn loãng vào blocking buffer nhằm mục đích ngăn sự bám không chăm biệt của nó vào pha rắn. Ở đây, phần lớn phần của blocking buffer không nên chứa ngẫu nhiên kháng nguyên làm sao mà có thể kết phù hợp với kháng thể bắt. Sau khoản thời gian ủ cùng rửa, chỉ với phức hợp phòng nguyên - chống thể bám dính pha rắn.
Kháng thể bắt sau đó được thêm vào. Vì chưng vậy, đó là sự kết hợp trực tiếp với kháng nguyên đích và kháng thể bắt. Chống thể trang bị hai này có thể giống phòng thể một hoặc khác về nguồn động vật hoang dã hay loài động vật sản xuất phòng thể. Sau khoản thời gian ủ, rửa, thêm cơ chất vào cùng đọc trên máy đo quang phổ. Vì sử dụng một kháng thể kết nối với enzyme nên hệ thống bị giới hạn về tính chất chuyên biệt và số đông thành phần nối sát với kháng thể chuyên biệt. Điều này giới hạn sự linh động của phương pháp, ví dụ như mỗi kháng thể được sử dụng phải được ghi lại riêng (cho các kháng nguyên không giống nhau). Theo cách này, direct ELISA bị số lượng giới hạn về sự chuẩn bị kháng thể. Hệ thống cũng trở thành giới hạn ở phần kháng nguyên đề xuất có ít nhất hai epitope bởi cả hai chống thể bắt với phát hiện đều phối kết hợp trực tiếp với chống nguyên.
Kháng thể bắt trên trộn rắn và chống thể phát hiện rất có thể chống lại phần lớn epitope khác nhau trên phức hợp kháng nguyên. Vì chưng đó, tiện lợi khi khảo sát điều tra sự không giống biệt nhỏ tuổi giữa phần nhiều kháng nguyên nếu sử dụng kháng thể phát hiện nay và phòng thể bắt không giống nhau. Việc sử dụng cùng một chống thể bắt cùng phát hiện rất có thể dẫn đến vụ việc khi có giới hạn về vị trí kết nối sẵn có cho sự phát hiện. Form size và mối quan hệ không gian của các epitope trên chống nguyên đích là rất quan trọng và bao gồm thể ảnh hưởng mạnh cho thử nghiệm.
Sandwich ELISA có thể được chia làm hai hệ thống:
2.3.1 Sandwich ELISA trực tiếp
- Ưu điểm: có thể phát hiện sự không giống biệt nhỏ dại giữa các kháng nguyên nếu sử dụng kháng thể bắt và chống thể phát hiện khác nhau.- Vì phương pháp này có điểm mạnh hơn hẳn những phương thức khác mà shop chúng tôi chọn phương pháp này nhằm chẩn đoán dịch virus đang nghiên cứu.
Chú ý: nếu sử dụng kháng thể bắt và chống thể phạt hiện như thể nhau hoàn toàn có thể dẫn đến vụ việc nếu bao gồm sự giới hạn vị trí phối kết hợp sẵn có để phân phát hiện. Quan hệ về kích cỡ và vị trí không gian của các epitope cũng có tác động đến test nghiệm.
2.3.2 Sandwich ELISA loại gián tiếp
Chuyên biệt rộng Direct sanwich ELISA bởi antispecies kháng thể được gắn enzyme không phản ứng với chống thể bắt kháng nguyên.
2.4. Phản nghịch ứng ức chế /cạnh tranh
Phản ứng cạnh tranh mang tức thị hai chất tham gia phản bội ứng cùng ái lực bắt cặp với hóa học thứ ba. Làm phản ứng đối đầu đúng đắn thì hai chất đối đầu phải được gửi vào đồng thời.
Sự khác hoàn toàn giữa ức chế và cạnh tranh. Cả hai phản ứng đều sở hữu sự thâm nhập của hai chống thể phản ứng với phòng nguyên. Trường hợp một chống thể được ủ trước phản bội ứng này được gọi là khắc chế (blocking/ inhibition assays). Phản nghịch ứng cạnh tranh mang nghĩa cả hai chống thể được thêm vàođồng thời cùng nhau (hình 1).
2.4.1. Direct C-Elisa: chất vấn kháng nguyên
Direct C-ELISA khám nghiệm kháng nguyên được diễn tả ở sơ đồ 2.5
Trong hệ thống trực tiếp, lượng phòng nguyên trên bề mặt đĩa cùng lượng kháng thể đính thêm enzyme đang được chuẩn chỉnh độ để tối ưu. Kháng nguyên và chống thể gắn enzyme được phân phối đĩa và một lúc để sản xuất ưu chũm cạnh tranh.
Nếu phòng nguyên tương tự hoặc thuộc như chống nguyên đã có gắn trên đĩa thì kháng thể lắp enzyme đang gắn lên phòng nguyên này. Lúc nồng độ của phòng nguyên đối đầu cao sẽ phòng cản bất kỳ sự kết hợp của chống thể đính thêm enzyme với kháng nguyên trên bề mặt đĩa (cạnh tranh 100%). Ví như nồng độ kháng nguyên đối đầu giảm (ví dụ : pha loãng) sự đối đầu và cạnh tranh sẽ giảm. Vậy nên nồng độ phòng nguyên cạnh tranh càng tốt thì độ hấp thu màu càng giảm.
Kháng nguyên tuyên chiến và cạnh tranh có thể có thêm trực tiếp vào đĩa nếu như nó được pha loãng trong blocking buffer trước khi thêm phòng thể gắn enzyme.
Mức cạnh tranh ở mức theo thời gian phụ thuộc vào vào mối tương quan của độ đậm đặc phân tử buộc phải kiểm tra và phòng nguyên trên mặt phẳng đĩa (và nấc độ tương đương của chống nguyên).
Sau lúc ủ cùng rửa, lượng phòng thể được ghi lại được định lượng sau khi thêm cơ chất. Khi không có kháng nguyên trong chủng loại kiểm tra hay không có sự tương đương của phòng nguyên thì không có sự kết nối với kháng nguyên được khắc ghi và không có sự cạnh tranh với phòng nguyên này. Tác dụng là mẫu gồm chứa chống nguyên thì sự cạnh tranh làm sút cường độ màu sắc còn đối hội chứng âm thì không.
2.4.2.Direct C-Elisa: khám nghiệm kháng thể
Direct C-ELISA kiểm soát kháng thể được mô tả cụ thể ở sơ vật dụng 2.6.
Direct C-ELISA kiểm soát kháng thể tương tự như với Direct C-ELISA kiểm tra kháng thể. Sự tuyên chiến và cạnh tranh ở đó là giữa phòng thể trong chủng loại và chống thể được tiến công dẫu với những vị trí trên phòng nguyên trên đĩa. Mẫu và kháng thể ghi lại được trộn cùng với nhau trước khi thêm vào đĩa.
3.Các yếu tố tác động đến độ nhạy cảm của phản ứng ELISA
- số lượng kháng thể trước tiên được đã tích hợp đáy giếng- Ái lực của kháng thể thứ nhất đối với chống nguyên- Ái lực của kháng thể thứ hai đối với kháng nguyên
4.Các yếu tố tác động đến tác dụng ELISA
Nếu các đối bệnh âm cho hiệu quả dương tính thì có thể do sự lây lan từ hóa học tạo màu hoặc từ kháng thể được ghi lại hoặc chính những đối triệu chứng bị nhiễm. Trường hợp màu không xuất hiện đối với đối chứng dương hoặc so với mẫu thì buộc phải kiểm tra lại tất cả hoá chất gồm những: hạn sử dụng, nồng độ, điều kiện bảo quản Nếu màu sắc xuất hiện cực thấp đối với đối hội chứng dương cùng cả mẫu kiểm tra thì nên kiểm tra lại kháng thể được gắn enzyme với nồng độ của chất tạo màu. Nếu có tạo màu so với mẫu mà lại không tạo màu cùng với đối bệnh dương thì hoàn toàn có thể kiểm tra lại bắt đầu đối chứng, hạn thực hiện và điều kiện bảo quản. Khi chạy lại một phân tích trong đk đang chạm chán sự cầm cố thì chỉ nên biến hóa một nguyên tố thí nghiệm.
