1. Xét nghiệm ELISA có cơ chế như vậy nào?
Nguyên lý của nghệ thuật ELISA là nhờ vào tính đặc hiệu kháng nguyên - chống thể và được thực hiện bằng những bước cơ phiên bản sau: chống nguyên - antigen (KN) hoặc phòng thể - antibody (KT) đã biết được gắn trên một giá chỉ thể rắn, tiếp đến cho mẫu có chứa chống thể - antibody (KT) hoặc phòng nguyên (KN) phải tìm vào giếng và sau cuối là thêm cơ hóa học vào để enzyme phân giải cùng phát ra tín hiệu, tín hiệu thông dụng nhất là sự đổi màu của những chất hóa học.Bạn đang xem: Kỹ thuật elisa
Để có thể thực hiện tại 1 bội phản ứng ELISA thì nên ít độc nhất 1 phòng thể đặc hiệu bắt cặp với 1 kháng nguyên rõ ràng nào đó. Các mẫu bao gồm lượng kháng nguyên chưa biết số lượng được cố gắng định trên một giá thể rắn hoặc không đặc hiệu hoặc đặc hiệu.
Sau khi cố định và thắt chặt kháng nguyên, kháng thể phạt hiện sẽ tiến hành thêm vào và tạo ra phức hợp với kháng nguyên. Kháng thể phát hiện nay sẽ links với enzyme hoặc chính nó sẽ được phát hiện vị kháng thể trang bị cấp links với enzyme bằng links cộng hóa trị giữa những phân tử sinh học. Phần nhiều phần của chống thể ELISA tương tự phương thức western blot.
Giữa những bước, người ta dùng dung dịch rửa nhằm rửa đĩa, thải trừ các protein và phòng thể không gắn. Sau lần cọ cuối cùng, cơ hóa học được phân phối để enzyme phân giải với phát ra tín hiệu bắt gặp được từ kia giúp đã cho thấy lượng chống nguyên/kháng thể tất cả trong mẫu.
Xét nghiệm ELISA có ý nghĩa sâu sắc lớn đối với y học
2. Những loại xét nghiệm ELISA
ELISA được sử dụng như một chính sách để chẩn đoán y học cũng tương tự các bệnh lý học thực vật, dùng làm kiểm tra, kiểm soát quality trong các ngành không giống nhau.
Xét nghiệm này có nhiều loại sử dụng cho những nhiều loại bệnh khác biệt như lây nhiễm trùng trực tiếp, lan truyền trùng gián tiếp, sandwich hay tuyên chiến và cạnh tranh nhưng chúng đều luôn luôn tuân theo qui định chung chính là phát hiện ra kháng nguyên/kháng thể nhờ phòng thể sệt hiệu do hình thức miễn dịch học.
2.1. ELISA trực tiếp
Đây được nhìn nhận là cách thức đơn giản tốt nhất của ELISA, phòng nguyên sẽ tiến hành hấp phụ lên một tấm nhựa tiếp nối thêm một lượng lớn protein (thường là BSA) vào nhằm khóa các vị trí liên khác. Trong những khi đó, enzyme link sẽ link với một kháng thể ở 1 phản ứng không giống và phức hợp này đang hấp phụ các kháng nguyên.
Sau khi phức hợp dư thừa bị loại bỏ bỏ thì các phức hợp có gắn kháng nguyên/kháng thể - enzyme đã còn đọng lại trên giếng. Fan ta thêm cơ hóa học đặc hiệu của enzyme vào để xảy ra phản ứng cơ chất và enzyme từ đó những tín hiệu sẽ phát ra và là thay mặt đại diện cho con số kháng nguyên bao gồm trong mẫu.
Lấy chủng loại xét nghiệm ELISA trên nhà
2.2. ELISA con gián tiếp
Phương pháp này bao hàm 2 bước tương quan tới quy trình gắn phòng thể sơ cấp và thứ cung cấp đã được tấn công dấu. Ban đầu kháng thể sơ cấp sẽ được ủ với phòng nguyên tiếp nối mới ủ với phòng thể máy cấp. Nhưng điều đó đôi khi có thể dẫn đến việc những tín hiệu trở đề xuất không quánh hiệu vì hoàn toàn có thể xảy ra rất nhiều phản ứng chéo với chống thể thứ cấp.
ELISA sandwich bao gồm độ nhạy cảm cao
ELISA sandwich tất cả độ nhạy cao là 1 trong những loại ELISA ít thịnh hành hơn cơ mà lại đem lại kết quả cao trong phân phát hiện phòng nguyên. Hơn nữa, không ít bộ kit thương mại dịch vụ đã được xây dựng nhờ vào ELISA sandwich. Các bước ELISA khá trở ngại và để tối ưu hóa được thì cần phải kiểm tra phần nhiều kháng thể bắt cặp sai. Điều này sẽ đảm bảo kháng thể phân phát hiện phần đông epitope không giống trên protein đích và khiến cho chúng không cản trở đầy đủ kháng thể đang gắn.
2.3. ELISA cạnh tranh
Vấn đề chủ yếu của ELISA tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh đó là quá trình gắn mang tính đối đầu của phòng nguyên nơi bắt đầu (mẫu) và kháng nguyên thêm vào. Tiến trình của phương pháp này đã khác hơn so với các cách thức ELISA còn lại.
3. Ứng dụng xét nghiệm ELISA vào Y học
Xét nghiệm này có ý nghĩa và ứng dụng không nhỏ trong y học, cố kỉnh thể:
3.1. Lựa chọn ung thư, thử nghiệm thuốc và sở hữu thai
Như đang nói ở đầu bài xích thì cách thức ELISA được áp dụng rất nhiều trong số những ngành không giống nhau. Trong y học, ELISA được thực hiện và ứng dụng trong số những thực hành lâm sàng xét nghiệm cho tất cả những người bị ung thư ở tiến trình đầu gồm có ung thư vú cùng ung thư phòng trứng.
ELISA được dùng để làm phát hiện những chất bất hợp phát như cannabinoids, cocaine, thuốc phiện,… Đây cũng là phương thức dùng nhằm theo dõi độ dược hóa học với người mắc bệnh đang trong quá trình điều trị.
Xét nghiệm này cũng được dùng vào chẩn đoán các bệnh như:
HIV
Lyme
Thiếu máu ác tính
Tiêu chảy vày rotavirus
Sốt đốm
Ung thư biểu mô tế bào vảy
Toxoplasmosis
Virus Zika
Virus varicella - zoster, gây zona với thủy đậu
3.2. Phát hiện không thích hợp thực phẩm
Xét nghiệm này được áp dụng trong công nghiệp thực phẩm nhằm phát hiện mọi chất gây không thích hợp trong thực phẩm, tiếp đến đưa ra lưu ý bằng việc dán nhãn trên bao bì sản phẩm.
Độ nhạy bén của ELISA cho phép phát hiện các chất gây dị ứng độc hại thực phẩm tại mức thấp trên 1 phần triệu (ppm). Nghệ thuật này cũng rất kết quả khi áp dụng để kiểm tra dầu, tròng trắng trứng tốt sữa mà PCR cần thiết phát hiện nay được.
3.3. Phát hiện phòng thể tè cầu
Việc phát hiện nay tiểu mong ở trong huyết thanh tất cả vai trò xác định xem bệnh dịch nhân bao gồm bị mắc xôn xao xuất huyết sút tiểu ước tự phân phát hay bệnh lupus ban đỏ hệ thống hay không. ELISA cũng là phương thức phát hiện nay tiểu mong ít tốn kém với phức tạp. ELISA cũng hỗ trợ các thông tin nhiều hơn những xét nghiệm khác ví dụ như xét nghiệm LCT hay xét nghiệm PIFT.
Xét nghiệm ELISA có ý nghĩa to phệ trong y học
3.4. Phạt hiện phòng thể phòng virus/vi khuẩn
Dùng ELISA nhằm phát hiện nay virus vẫn được áp dụng tại những nước, mọi nơi có phần trăm lây nhiễm cao và hoàn toàn có thể dễ dàng tiếp cận nhóm tín đồ có nguy cơ bị tổn hại để chất vấn và cho kết quả lập tức. Điều này cho phép y chưng sĩ có thể thực hiện tại những biện pháp điều trị quan trọng và kịp thời đối với bệnh nhân.
ELISA là 1 trong những kỹ thuật được sử dụng đa số trong miễn dịch học, ứng dụng rộng thoải mái trong những ngành y học, thực phẩm, nông nghiệp,… trong y học, kỹ thuật ELISA được ứng dụng trong số xét nghiệm HIV, những bệnh viêm gan hết sức vi hay những bệnh lý nhiễm ký sinh trùng,…1.Nguyên lý nghệ thuật ELISA
ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent assay) là một phương thức sinh hoá sử dụng đa số trong miễn kháng học để phát hiện nay sự hiện hữu của một chống thể hoặc phòng nguyên trong một mẫu.
Hình 1: nguyên lý ELISA
Nguyên lý của chuyên môn ELISA là dựa vào tính quánh hiệu phòng nguyên - chống thể cùng được tiến hành bằng những bước cơ bản sau: phòng nguyên - antigen (KN) hoặc phòng thể - antibody (KT) đã hiểu rằng gắn bên trên một giá chỉ thể rắn, kế tiếp cho mẫu gồm chứa chống thể - antibody (KT) hoặc phòng nguyên (KN) đề nghị tìm vào giếng. Bổ sung cập nhật thêm phòng thể có gắn với ezyme. Bước ở đầu cuối thêm cơ hóa học (substance), enzyme sẽ đổi khác cơ hóa học này và tạo biểu hiện màu rất có thể xác định được bằng máy đo huỳnh quang.
2. Các phương thức ELISA
ELISA thẳng (direct ELISA):
Phương pháp này thường sử dụng trong ELISA định tính, ít dùng trong định lượng. Phương pháp này có ưu điểm là chỉ cần một lần ủ cho nên tiết kiệm thời hạn và tối thiểu được việc kiểm soát các đk trong quá trình thực hiện nay (thay đổi ánh sáng và buffer cho từng lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, nhược điểm của nó là nhuộm color nền (background staining) cao vày sự liên kết không sệt hiệu của phòng thể với mặt phẳng rắn và những protein thắt chặt và cố định trên mặt phẳng rắn. Việc khắc ghi từng một số loại kháng thể sử dụng cho từng kháng nguyên cũng rất tốn kém, nhất là khi phải chẩn đoán một số trong những lượng lớn những loại phòng nguyên không giống nhau.
ELISA loại gián tiếp (indirect ELISA):
Ưu điểm của phương pháp này là độ nhạy cao chỉ cần tạo một loại kháng phòng thể với enzyme để nhận thấy cho các kháng nguyên không giống nhau. Tuy nhiên nhược điểm của chính nó là tăng số bước tiến hành do đó làm tăng việc kiểm soát điều hành các điều kiện, quá trình thực hiện nay xét nghiệm và kéo dãn dài thời gian chẩn đoán.
ELISA sandwich:
Phương pháp này có tương đối nhiều ưu điểm quá trội, trước tiên là độ tinh tế cao sút được nhuộm màu sắc nền và các phản ứng không sệt hiệu bởi vì đã sa thải được phần lớn các nguyên tố tạp, phản nghịch ứng được thực hiện thuận lợi hơn.
Hình 2: Các cách thức kỹ thuật ELISA
ELISA cạnh tranh (competitive ELISA)
ELISA đối đầu là cách thức ELISA rất công dụng cho định lượng những yếu tố hiện hữu trong mẫu với lượng nhỏ. ELISA tuyên chiến đối đầu sử dụng một lượng chống nguyên cùng nhiều loại với phòng nguyên cơ mà ta muốn định lượng trong mẫu mã (kháng nguyên cạnh tranh) cho phản ứng miễn dịch với 1 loại kháng thể đặc hiệu cố định và thắt chặt trên khía cạnh rắn, tiếp nối đo lượng chống nguyên tuyên chiến và cạnh tranh này trải qua hoạt tính enzyme được link với nó. Chống nguyên tuyên chiến và cạnh tranh càng hiện hữu nhiều cho biết loại phòng nguyên đó trong chủng loại càng ít cùng ngược lại.
3. Phần đông điều cần lưu ý khi thực hiện kỹ thuật ELISA
Do chuyên môn ELISA là kỹ thuật miễn dịch bán auto nên công dụng xét nghiệm đã bị tác động nhiều bởi những yếu tố như: bé người, mức sử dụng thao tác, hóa chất, thứ phân tích. Để thống trị chất lượng giỏi các kỹ thuật xét nghiệm ELISA yêu ước phải triển khai đúng theo các bước của mỗi loại xét nghiệm.
3.1. Khí cụ và hóa chất
- Ống nghiệm.
- giá chỉ đựng ống nghiệm.
- Micropipette có các thể tích khác nhau từ 1^l cho 1000^l.
- Đầu type nhựa đã tích hợp Micropipette.
- Giấy thấm.
- lắp thêm rửa giếng ELISA.
- đồ vật đọc ELISA.
- bộ hóa chất gồm có:
+ các thanh nhựa sẽ gắn phòng nguyên/kháng thể + dung dịch rửa.
Xem thêm: Tăng Trưởng Phát Triển Phát Triển Bền Vững, Phát Triển Bền Vững Để Cân Bằng Tăng Trưởng
+ Calibration + triệu chứng âm + hội chứng dương.
+ cùng hợp.
+ Cơ chất.
+ hỗn hợp pha loãng huyết thanh.
+ hóa học ngưng phản nghịch ứng.
3.2. Mẫu bệnh phẩm
+ thực hiện mẫu máu tĩnh mạch được bỏ vô vào ống nghiệm sạch không chứa chất chống đông hoặc tất cả chứa chất chống đông (Heparin/EDTA) tùy thuộc vào yêu cầu từng một số loại xét nghiệm.
+ Mỗi mẫu máu sẽ được để vào những ống nghiệm lẻ tẻ có dán mã Barcode với tên tuổi đầy đủ, có nắp đậy vặn kín.
+ các mẫu tiết được cho vào hộp bí mật vận đưa về chống xét nghiệm trong thời gian sớm nhất.
+ thường thì các mẫu mã máu để làm các xét nghiệm ELISA sẽ bình ổn trong 12h ở ánh nắng mặt trời phòng từ 20 - 25 ºC, ánh nắng mặt trời 2 - 8 ºC bình ổn trong 24 - 48h.
+ Tại chống xét nghiệm những mẫu máu sẽ được phân phối về quanh vùng thực hiện tại từng xét nghiệm riêng cùng mã hóa số mẫu mã theo từng thương mại & dịch vụ xét nghiệm để hạn chế việc lây nhiễm chéo hoặc nhầm lẫn mẫu dịch phẩm.
3.3. Quản lý chất lượng
Kỹ thuật ELISA là kỹ thuật miễn dịch bán tự động hóa cho bắt buộc việc làm chủ chất lượng trong quá trình làm xét nghiệm đóng góp một vai trò vô cùng quan trọng. Quan trọng phải đưa ra rất nhiều quy trình điều hành và kiểm soát chất lượng chặt chẽ tại từng bước thực hiện:
+ Trước xét nghiệm: Mẫu bệnh phẩm yêu cầu đạt yêu ước không được vỡ hồng cầu, không nhiễm khuẩn, mật độ mỡ huyết cao cũng tác động đến kết quả xét nghiệm.
+ trong xét nghiệm: triển khai Calibration với Control trong những lần tiến hành mẫu theo đúng yêu ước của từng cỗ kít xét nghiệm.
+ Sau xét nghiệm: tác dụng mẫu bệnh nhân chỉ được đồng ý khi đường Calibration và Control trong và một lần thực hiện đạt tác dụng tốt. Hiệu quả sau khi tiến hành phân tích xong xuôi nên thực hiện các phần mềm ghi nhận hiệu quả trực tiếp, kiêng ghi thủ công bằng tay gây sai số công dụng do nhầm lẫn lúc vào sổ.
3.4. Quy trình kỹ thuật
Thực hiện theo đúng hướng dẫn trong phòng sản xuất.
Quy trình gồm các bước chính sau đây:
Bước 1: mang lại mẫu dịch nhân, chứng âm, bệnh dương vào giếng nhựa đã gắn sẵn chống nguyên/kháng thể. Ủ ở ánh nắng mặt trời phòng hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo hướng dẫn của phòng sản xuất.
Bước 2: Rửa các giếng bằng dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy đến ráo nước.
Bước 3: cho cộng hòa hợp vào mỗi giếng, ủ ở ánh nắng mặt trời phòng hoặc 37 ºC, thời gian ủ theo phía dẫn trong phòng sản xuất.
Bước 4: Rửa những giếng bằng dung dịch đệm PBS - Tween 20, thấm giấy mang lại ráo nước.
Bước 5: mang lại cơ hóa học vào từng giếng, đợi chờ cho màu mở ra (15 - 30 phút).
Bước 6: mang lại dung dịch ngưng phản bội ứng.
Bước 7: Đọc tác dụng bằng máy đọc ELISA tự động
Hình 3: làm phản ứng ELISA sandwich
Tóm lại trong những bước của tiến trình kỹ thuật ELISA đều phải có khả năng ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm giả dụ như bạn kỹ thuật viên thực hiện không làm cho đúng theo quá trình đã xây dựng. Những yếu tố nguy hại hay chạm mặt có thể dẫn cho sai số hiệu quả là:
+ hóa chất không để định hình ở nhiệt độ phòng trước lúc làm xét nghiệm.
+ Hút không nên thể tích chủng loại pha loãng, không đúng thể tích dung dịch thử.
+ thời gian ủ và ánh sáng không đúng: gây âm tính hoặc dương tính giả.
+ Rửa ko sạch: nên áp dụng máy rửa auto để bảo đảm đủ thể tích nước rửa và mốc giới hạn rửa, không thấm thô khay mẫu sau thời điểm rửa xong.
+ ko đọc công dụng ngay sau khi dừng phản bội ứng.
3.5. Biện luận kết quả
- Ngưỡng dương tính rất có thể khác nhau so với từng loại xét nghiệm. Biện luận kết quả dựa trên ngưỡng dương tính vày nhà thêm vào đưa ra.
- các kỹ thuật miễn dịch phát hiện chống thể cho tác dụng gián tiếp, không có giá trị hay đối.
- tác dụng âm tính cũng không loại bỏ hoàn toàn ko nhiễm bệnh, có thể do mới bị nhiễm, hoặc bị lây truyền quá lâu, hoặc lượng kháng nguyên/kháng thể quá không nhiều để có thể phát hiện tại được bằng cách thức ELISA. Trong trường hợp nghi vấn mắc dịch trên lâm sàng buộc phải làm lại xét nghiệm sau 1-2 tuần. Xét nghiệm vài ba lần nhằm theo dõi dịch chuyển của phòng thể/ phòng nguyên có mức giá trị rộng là xét nghiệm một lần. Nếu như cần, yêu cầu kiểm tra lại bằng các kỹ thuật khác.
- công dụng dương tính cũng ko khẳng định trọn vẹn vì rất có thể dương tính giả do phản ứng chéo cánh giữa những loại ký sinh trùng hoặc căn nguyên gây bệnh.
Vì vậy, các phản ứng miễn kháng tìm kháng nguyên/kháng thể ko thể nỗ lực thế hoàn toàn xét nghiệm trực tiếp trong chẩn đoán tại sao bệnh. Công dụng xét nghiệm, cho dù âm giỏi dương, cũng rất cần phải xem xét một cách cẩn thận, kết phù hợp với các yếu tố dịch tễ hoặc đông đảo xét nghiệm bổ sung khác (sinh học phân tử, nuôi cấy tế bào…) và những cung ứng phi lâm sàng khác (XQ, khôn xiết âm…).
Với nhóm ngũ chuyên gia, chưng sĩ giàu khiếp nghiệm, hệ thống máy móc hiện đại cũng giống như quy trình làm chủ chất lượng nghiêm nhặt (theo tiêu chuẩn chỉnh ISO 15189:2012), chuyên môn ELISA được triển khai tại cơ sở y tế Đa khoa phattrienviet.com luôn đảm bảo kết quả xét nghiệm nhanh chóng nhất, đúng mực nhất. Mọi vướng mắc xin contact tổng đài 1900 565656 để được support và giải đáp.
Bạn cũng có thểThích
